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基础研发目前的主要研究方向为慢病毒(LV)载体改造、腺病毒(ADV)容量改造、腺相关病毒(AAV)血清型筛选、特异性启动子优化、以在体应用为核心的CRISPR/Cas9技术综合开发以及其它的生物学研究工具的研发。
病毒载体是实现基因递送、完成基因操作的关键环节,因此,对病毒载体的改造在研究和应用中有着特殊的重要地位。新普京888.3app研发部针对病毒载体的改造主要包括腺相关病毒的体内应用改造,包括数十种靶向特异器官血清型、多种类型的AAV血清型文库、慢病毒和腺病毒的改造。
现在研究中常用的rAAV就是利用AAV2型基因组与不同的衣壳蛋白结合产生的混合体病毒载体,一般标记为rAAV2/N (N为不同的衣壳血清型)。重组的病毒具有AAV2型的稳定表达和基因整合能力,同时获得了不同血清型的组织感染嗜亲性(不同血清型衣壳表面的特定结构位点决定了各自受体的特异性),表现出一定的器官靶向特异性。
不同血清型AAV的组织嗜亲性
血清型 |
组织亲和性 |
rAAV2/1 |
神经系统(高滴度顺向跨突触),肌肉,骨骼肌,心肌,平滑肌 |
rAAV2/2 |
神经系统,肌肉,肝脏,血管平滑肌,眼 |
rAAV2/3 |
肌肉,肝脏,肺,眼 |
rAAV2/4 |
神经系统,肌肉,眼,脑 |
rAAV2/5 |
神经系统,肺,视网膜,肝脏,滑膜关节 |
rAAV2/6 |
神经系统,肺,肌肉,心脏 |
rAAV2/7 |
肌肉,肝脏 |
rAAV2/8 |
神经系统,肝脏,胰腺,视网膜,脂肪组织 |
rAAV2/9 |
神经系统,心肌,肺,视网膜,皮肤,肌肉,脂肪组织 |
rAAV2-retro |
神经系统(逆向非跨突触) |
AAV-PHP.eB |
跨血脑屏障(静脉注射) |
AAV-PHP.S |
全外周神经(尾静脉注射) |
AAV-PAN |
胰腺(腹腔注射) |
AAV-LUNG |
肺(尾静脉注射) |
AAV-DJ |
视网膜,肺,肾脏,体外感染细胞 |
AAV-7m8 |
视网膜 |
AAV-ShH10Y |
视网膜Muller细胞 |
AAV-Rh10 |
肝脏,血液,心脏,体外感染细胞 |
AAV-Anc80L65 |
内耳、视网膜、骨骼肌、肝脏 |
AAV-SCH9 |
SVZ区神经干细胞 |
AAV-2M |
视网膜 |
AAV-BR1 |
脑血管内皮细胞 |
AAV6-TM6 |
小胶质 |
靶向特异器官AAV血清型感染案例
1、rAAV2-retro:神经系统(逆向非跨突触)
注射部位:小鼠BPN
注射方式:脑定位注射
载体:rAAV2-retro-hSyn-EYFP
观察时间:4周
2、AAV-PHP.eB:神经系统全脑表达(跨血脑屏障)
注射方式:尾静脉注射
载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG & pAAV-CMV-mNeonGreen-3FLAG
血清型:AAV-PHP.eB
病毒滴度:1.10×1013VG/mL & 2.35×1013 VG/mL
注射体积:200nl(注射病毒总量:1.5×1011 VG)
观察时间:3周
3、AAV-PAN:特异性感染胰腺
4、AAV-LUNG:特异性感染肺部
注射方式:尾静脉注射
载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG
血清型:AAV-LUNG
注射量: 2x1011 VG /只(滴度:1.49 x1013 VG/mL),
注射体积:200 uL
观察时间:3周
5、AAV-DJ体外感染293T细胞
AAV-DJ(MOI=10
5) AAV8(MOI=10
5 )